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了解一下液相色譜儀的五大系統(tǒng)組成

更新時(shí)間:2023-03-16      點(diǎn)擊次數(shù):3729
  液相色譜儀是由各個(gè)系統(tǒng)組成的,它各個(gè)系統(tǒng)相結(jié)合可以提供更高的可靠性、穩(wěn)定性和易操作性,每一個(gè)系統(tǒng)它的作用盡不相同,那么液相色譜儀由什么系統(tǒng)組成,各個(gè)系統(tǒng)又有什么作用?下面就來告訴大家。
 
  液相色譜儀的五大系統(tǒng)組成如下:
 
  1.進(jìn)樣系統(tǒng)
 
  一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作進(jìn)樣量是恒定的。
 
  這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
 
  2.輸液系統(tǒng)
 
  該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4X107Pa流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、pH值或改用
 
  3.分離系統(tǒng)
 
  該系統(tǒng)包括:色譜柱、連接管和恒溫器等。
 
  色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時(shí),可在二者之間加一連接管)內(nèi)徑為2~5mm,由優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,柱內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成),固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性(如,硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如,磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。
 
  因此,這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小、微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。
 
  4.檢測(cè)系統(tǒng)
 
  液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種:
 
  紫外檢測(cè)器
 
  該檢測(cè)器適用于對(duì)紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測(cè)。
 
  其特點(diǎn):使用面廣(如,蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測(cè)下限為10-10g/mL);線性范圍寬;對(duì)溫度和流速變化不敏感;可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。
 
  5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
 
  該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
 
  綜上所述,液相色譜儀由樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,這幾個(gè)系統(tǒng)相結(jié)合,使實(shí)驗(yàn)更可靠、穩(wěn)定。
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